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按照不同的方式進(jìn)行分類與選擇合適的酶標(biāo)板是行之有效的

更新時(shí)間:2022-09-13

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酶標(biāo)板,是一種配合在酶標(biāo)儀上,用來(lái)做酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)的器材。雖然它看上去只是一塊普通的有孔的塑料板,但是在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)中,酶標(biāo)板是一個(gè)不可少的中介,沒有了這個(gè)中介,整個(gè)實(shí)驗(yàn)就無(wú)法進(jìn)行操作。換一句話說(shuō),只要你用酶標(biāo)儀做酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn),就必然會(huì)用到酶標(biāo)板。

酶標(biāo)板種類繁多,可以按照不同的方式進(jìn)行分類與選擇:

一:根據(jù)酶標(biāo)板底部的不同,可以分為:

1、平底:平底的折射率低,適于在酶標(biāo)儀檢測(cè)。
2、U型底:U型底的酶標(biāo)板折射率較高,方便加樣、吸樣、混勻等操作,可以不用放在酶標(biāo)儀上,直接通過(guò)目測(cè)觀察顏色變化情況,從而判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng).
3、V型底:V底的酶標(biāo)板可以精確的吸取樣品。

 

二:根據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同,分為:

1、高結(jié)合力:表面經(jīng)處理后,其蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng),可達(dá)300~400ngIgG/cm2,主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性,并可相對(duì)減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)??乖蚩贵w包被后,以非離子去污劑無(wú)法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。

2、中結(jié)合力:經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與蛋白結(jié)合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結(jié)合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性交叉反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

3、氨基化:經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過(guò)離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過(guò)其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無(wú)法結(jié)合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用。

 

三:根據(jù)顏色分為:

1、透明:透明的是比較常用的,用于一般的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)。不能用透明的酶標(biāo)板來(lái)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)。
2、不透明:相對(duì)于透明的的板子,還有用于發(fā)光檢測(cè)用的不透明的板子,一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標(biāo)板自身會(huì)有光吸收,所以它的信號(hào)相對(duì)于白色的板子要低很多,因此一般用于檢測(cè)較強(qiáng)的光,如熒光檢測(cè)。而白色的酶標(biāo)板就用于較弱的光檢測(cè),常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標(biāo)板還可以消弱非特異反應(yīng)帶來(lái)的問題。
 

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